Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的更进一步中逐渐扩展

从第一次经常出现肝细胞自身免疫催化到经常出现1型式乳癌药理学病征的令人满意率在成人时期就有很好的叙述，多个肝细胞自身免疫催化阴性的成人里面有70%在小鼠转换成后10年内患上乳癌，而随访15年的成人这一比重减低到84%。比起之下，占到药理学1型式乳癌一半以上的型式1型式乳癌的发病机制还无法受益前提的科学研究。

越来越多的人开始采用分期系统来界定1型式乳癌的令人满意：有机体在经常出现多种肝细胞自身免疫催化时进到第1阶段性，经常出现血糖精神状态时进到第2阶段性，经常出现病征时进到第3阶段性。一些多发肝细胞自身免疫催化阴性的有机体，在1期和2期，令人满意较慢，并演进为发病的1型式乳癌。我们在此之前叙述了举例来说成员在首次侦测到多种肝细胞自身免疫催化抽取后至多于10年无乳癌的非常慢令人满意者，这组成员病征人数多于，但特性非常为明确。随后，我们发现肝细胞自身肝细胞特异性CD8+T本站粒体催化在令人满意很慢的病征里面基本不实际上，但在近期发病和仍然实际上的乳癌病征里面很容易侦测到。这可能会得出结论，与令人满意病征比起，这些病征自身免疫催化的缓冲提升。

以前科学研究得出结论，尽管缓冲性T本站粒体(Treg)数量正常人，但乳癌病征实际上一些功用缺陷，其里面包括对IL-2的催化能够减少。此外，乳癌病征里面的effectCD4+T本站粒体可能会对缓冲非常具抵抗性，表现为effectT本站粒体的可抑制提升，自然造成的Treg和排泄造成的其会Treg，以及肝细胞经历的CD4+T本站粒体里面IL-2催化提升。本科学研究的借此是叙述了CD4+缓冲性T本站粒体(Treg)在在在极很慢令人满意者里面的特性，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群基础上的纵向科学研究，在21岁请注意肺炎的病征亲属里面核对1型式乳癌的危险诱因。我们在此之前叙述了仍然很慢令人满意者的特性，他们保持多重肝细胞自身免疫催化阴性超过10年，但无法经常出现乳癌的药理学病征，慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名暂时保持无乳癌并想发放大量血液抽取的很慢令人满意者纳入T和B本站粒体功用分析。在目前的科学研究里面，8名慢令人满意者(SP组成员)，里面位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的肝细胞自身免疫催化阴性。所有的行动者都所处1型式乳癌令人满意的1期，尽管一些人随后耗尽了肝细胞自身免疫催化对某些肝细胞的阴性催化，然而，一名病征已经所处2期至多于6年，但无法经常出现药理学病征，一名病征被诊断为乳癌，该患者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里面对该丝氨酸同步进行了除此以外指标。除去外周血单个核本站粒体(PBMCs)，采用多参数流式本站粒体绝技和T本站粒体可抑制试验指标丝氨酸里面Treg的频带、变异和功用。采用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、总括和回归)同步进行无指派聚类分析，指标Treg变异。

结果：与有益丝氨酸比起，来自慢令人满意体的心灵CD4+T本站粒体的指派聚类揭示，抑制的心灵CD4+ Treg频带减低，与糖皮质激素其会的TNFR无关复合物(GITR)隐含减低有关。一名HbA1c升高的病征与令人满意很慢者和匹配的对照组成员比起，Treg对光各有各有不同。功用得出假设，与有益丝氨酸比起，来自很慢令人满意体的Treg介导的CD4+effectT本站粒体可抑制明显损坏。表现为对effectCD4+T本站粒体CD25和CD134隐含的可抑制减低。

上图1 系统地的变异分析揭示，CD4+Treg亚型式在慢令人满意函数调用里面减低。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -本站粒体上。根据标识物隐含认定出10个元簇:心灵T本站粒体_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T本站粒体;HLA-DR + GITR +心灵T本站粒体;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)采用9个各有不同Treg标识分解的10个元簇的MST。每个终端代表者一个战略性(100个战略性)，较大的元战略性(10个元战略性)在终端组成员周遭上色。每个终端里面的糕上图坚称单个标识的隐含级别。(b)每个元聚类的热上图，以揭示连续性标识隐含。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)分解上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较核素为每个metacluster装本站上图(核素> 0.05%)断定为HD和SP组成员:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T本站粒体(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T本站粒体(l)。橙色红色代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一大写秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 采用CITRUS的预测模型式属实，Treg频带的减低是令人满意很慢的logo。分级依赖型(a - f)和大豆分析(g-k)比较SP行动者和匹配的HD行动者在CD4+CD45RA−T本站粒体上的区别。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的标志性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR隐含同步进行除去，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(白点)组成员以及丝氨酸SP 606(橙色)里面CD25+ cd127的频带核心内容上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型姪集的装本站上图;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)柑桔簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，标记突出的簇被识别为SP和HD函数调用密切关系的各有不同。(j)装本站上图揭示了在SP(白点)和HD(灰点)组成员里面，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相较核素(比重)。(k)直方上图揭示每个簇的变异(粉红色)和Treg标识相较隐含与背景隐含(黄色);上列，线程Treg_3;下面几天后，线程Treg_4。背景与所有其他簇里面标识的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一大写秩检验

上图3 与有益献血者比起，令人满意很慢者心灵treg的GITR减低。每个心灵CD4+T本站粒体元簇(心灵T本站粒体_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T本站粒体;HLA-DR + GITR +心灵T本站粒体;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个隐含标识的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的隐含热上图(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇里面所有HD(黑色)、所有SP(黄色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR隐含联结，揭示直方上图(c)和核心内容上图(d)。Wilcoxon一对一大写秩和检验，p< 0.07(橙色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(黄色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR隐含，从分级依赖型，从所有HD(黑色)、所有SP(黄色)和SP 606(橙色)联结，揭示直方上图(e)和核心内容上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一大写秩检验

上图4 来自很慢令人满意的CD4+ treg本站粒体控制effectCD4+T本站粒体的能够减少。SP组成员用黄色的本站和红色坚称，HD组成员用黄色的本站和红色坚称，橙色的本站/红色坚称丝氨酸sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T本站粒体同步进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标识为CFSE, Treg按掩蔽的比重反应物。用抗CD3 /28微珠抑制本站粒体，培植3当晚同步进行流式本站粒体绝技侦测。(a-d)与CD4+需要的话者相较应的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制一般而言。采用阴性对照(抑制的响应本站粒体不含treg)计算可抑制一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 effectCD4+T本站粒体对很慢令人满意的T本站粒体抑制的可抑制非常极端。SP组成员用黄色的本站和红色坚称，HD组成员用黄色的本站和红色坚称，橙色的本站/红色坚称丝氨酸sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T本站粒体同步进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标识，treg按掩蔽的比重反应物。用抗CD3 /28微珠抑制本站粒体，培植3当晚同步进行流式本站粒体绝技(CD25反染)和本站粒体因姪分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者携手培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制三份(b)。(c,d) CD25可抑制三份(c)和CD134可抑制三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在培植出来里面的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们计算出来的假设是，来自很慢令人满意姪的抑制心灵CD4+Treg在GITR隐含里面受益了扩展到和丰富，强调了更进一步科学研究Treg在1型式乳癌危险性有机体里面的异质性的必要。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28