Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病人进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现人微内自身免疫重排到显现1DF心血管疾病药理学副作用的的工业发展率在老年人时期就有很好的描绘出，多个人微内自身免疫重排乙型肝炎的老年人出有处70%在血清转换后10年中入院心血管疾病，而随访15年的老年人这一人口比例提高到84%。相较之下，%药理学1DF心血管疾病一半以上的DF1DF心血管疾病的确诊机制还并未赢取充分的研究成果。

越来越多的人开始常用分段系统来度量1DF心血管疾病的的工业发展：母微在显现多种人微内自身免疫重排时转至第1阶段，显现摄入量极度时转至第2阶段，显现副作用时转至第3阶段。一些多发人微内自身免疫重排乙型肝炎的母微，在1期和2期，的工业发展很慢，并工业发展为确诊的1DF心血管疾病。我们之前描绘出了一分组在首次探测到多种人微内自身免疫重排验证后至少10年无心血管疾病的极慢的工业发展者，这分组病征人数少，但基本特征非常完全一致。随后，我们发掘出人微内自身复合物特异性CD8+T细胞会重排在的工业发展减慢的病征里大微上不依赖于，但在最近确诊和近十年依赖于的心血管疾病病征里很容易探测到。这显然表明，与的工业发展病征相较，这些病征自身免疫重排的缓冲大幅提高。

现代研究成果表明，尽管缓冲性T细胞会(Treg)数量经常性，但心血管疾病病征依赖于一些机制缺陷，其里除此以外对IL-2的重排能够增大。此外，心血管疾病病征里的振荡CD4+T细胞会显然对缓冲增添抵抗性，乏善可陈为振荡T细胞会的抑止减慢，自然转化成的Treg和微外转化成的正向Treg，以及复合物个人经历的CD4+T细胞会里IL-2重排减慢。本研究成果的目的是描绘出了CD4+缓冲性T细胞会(Treg)在一小群极减慢的工业发展者里的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

步骤：BOX研究成果是一项以人群为基础的横向研究成果，在21岁以下确诊的病征亲友里健康检查1DF心血管疾病的危险因素。我们之前描绘出了近十年减慢的工业发展者的基本特征，他们保持稳定多重人微内自身免疫重排乙型肝炎超过10年，但并未显现心血管疾病的药理学副作用，慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无心血管疾病并愿意透过大量血液验证的减慢的工业发展者纳入T和B细胞会机制分析。在现在的研究成果里，8名慢的工业发展者(SP分组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的人微内自身免疫重排乙型肝炎。所有的举例来说都受制于1DF心血管疾病的工业发展的1期，尽管一些人随后无法操控了人微内自身免疫重排对某些复合物的乙型肝炎重排，然而，一名病征之前受制于2期至少6年，但并未显现药理学副作用，一名病征被诊断为心血管疾病，该受测者72岁，在挖掘出实验验证时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在分析里对该正向顺利完成了单独分析报告。分开外周血单个核细胞会(PBMCs)，采行多数值流式细胞会奥义和T细胞会抑止试验分析报告正向里Treg的kHz、表DF和机制。常用FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)顺利完成无统筹聚类分析，分析报告Treg表DF。

结果：与健康正向相较，来自慢的工业发展微的无意识CD4+T细胞会的统筹聚类说明了，激能活的无意识CD4+ TregkHz提高，与糖皮质激素正向的TNFR无关蛋白(GITR)解读提高有关。一名HbA1c升高的病征与的工业发展减慢者和转换的大鼠相较，Treg谱有所不同。机制分析表明，与健康正向相较，来自减慢的工业发展微的Treg抑制的CD4+振荡T细胞会抑止引人注意受损。乏善可陈为对振荡CD4+T细胞会CD25和CD134解读的抑止提高。

所示1 透彻的表DF分析说明了，CD4+Treg亚DF在慢的工业发展字段里提高。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有正向的能活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标有物解读比对出有10个元簇:无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)常用9个不同Treg标有作用于的10个元簇的MST。每个终端值得一提的是一个协同(100个协同)，较大的元协同(10个元协同)在终端分组周围绘所示。每个终端里的饼所示透露单个标有的解读级别。(b)每个元聚类的热所示，以说明了整微标有解读。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)作用于所示，以及FlowSOM辨识的每个元簇的较厚。(e-l)相对于数量级为每个metacluster盒直通所示(数量级> 0.05%)确定为HD和SP分组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞会(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞会(l)。橘色圆圈值得一提的是捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 常用CITRUS的预测模DF证实，TregkHz的提高是的工业发展减慢的logo。分级无关联(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP举例来说和转换的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的纪念性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利完成分开，模拟FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及正向SP 606(橘色)里CD25+ cd127的kHz核心内容所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+无关联叔父集的盒直通所示;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读风力着色，箭头突出有的簇被辨识为SP和HD字段间的不同。(j)盒直通所示说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组里，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对于数量级(人口比例)。(k)直方所示说明了每个簇的表DF(粉红色)和Treg标有相对于解读与取材解读(深蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。取材与所有其他簇里标有的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证

所示3 与健康献血者相较，的工业发展减慢者无意识treg的GITR提高。每个无意识CD4+T细胞会元簇(无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个解读标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的解读热所示(sp606不除此以外在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里所有HD(红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR解读串连，说明了直方所示(c)和核心内容所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和验证，p< 0.07(橘色)所有正向除此以外，p< 0.05(深蓝色)正向SP 606和转换的HD不除此以外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR解读，从分级无关联，从所有HD(红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)串连，说明了直方所示(e)和核心内容所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩验证

所示4 来自减慢的工业发展的CD4+ treg细胞会操控振荡CD4+T细胞会的能够增大。SP分组用深蓝色的直通和圆圈透露，HD分组用黑色的直通和圆圈透露，橘色的直通/圆圈透露正向sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标有为CFSE, Treg按仔细观察的人口比例指示剂。用抗CD3 /28微珠激能活细胞会，培育3同月顺利完成流式细胞会奥义探测。(a-d)与CD4+反之亦然者相对于应的treg培育(其会)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。常用乙型肝炎对照(激能活的积极响应细胞会不含treg)近似值抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 振荡CD4+T细胞会对减慢的工业发展的T细胞会激能活的抑止更引人注意。SP分组用深蓝色的直通和圆圈透露，HD分组用黑色的直通和圆圈透露，橘色的直通/圆圈透露正向sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标有，treg按仔细观察的人口比例指示剂。用抗CD3 /28微珠激能活细胞会，培育3同月顺利完成流式细胞会奥义(CD25反染)和细胞会因叔父分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者携手培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止%-(b)。(c,d) CD25抑止%-(c)和CD134抑止%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育里的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们证明了有的论断是，来自减慢的工业发展叔父的激能活无意识CD4+Treg在GITR解读里赢取了扩展和丰富，特别强调了全面研究成果Treg在1DF心血管疾病风险母微里的异质性的前提。

文中出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28